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酸性土壤速效磷含量檢測試劑盒說明書
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
貨號：4073
規格：100T/96S
產品內容：
提取液：液體 125mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 5mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 5mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，室溫保存。
標準品：10μmol/mL 標準磷貯備液 1mL×1 支，4℃保存。工作液：35mL 棕色空瓶×1 瓶。
微量法
工作液（定磷劑）的配制：按 H2O：試劑一：試劑二：試劑三=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液應為淺黃色。若變色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，工作液應現配現用。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產品說明：
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態磷、一部分微溶性的無機磷和易礦化的有機磷等，土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一。
用雙酸法提取酸溶性磷和吸附態磷，鉬藍與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質，通過測定
660nm 光吸收，即可計算磷含量。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計/酶標儀、天平、臺式離心機、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調式移液槍、20 目篩、漩渦震蕩儀、EP 管、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理：
新鮮土樣風干，過 20 目篩，按照土壤質量（g）：提取液體積(mL)為 1：10-20 的比例（建議稱取約 0.05g 土樣，加入 1mL 提取液），振蕩提取 1h，10000g，25℃離心 10min，取上清液待測。 二、測定步驟：
1、 分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 660nm，蒸餾水調零。
2、 將 10μmol/mL 標準液用提取液稀釋為 6、4、2、1、0.5、0.25μmol/mL 的標準溶液備用。
3、 操作表：(在 1.5mL 離心管中或 96 孔板依次加入下列試劑)
測定管 | 標準管 | 空白管 | |
樣品（μL） | 20 | - | - |
標準溶液（μL） | - | 20 | - |
提取液（μL） | 40 | 40 | 60 |
工作液（μL） | 80 | 80 | 80 |
H2O（μL） | 60 | 60 | 60 |
充分混勻，25℃靜置 30min，將液體置于微量玻璃比色皿/96 孔板中，測定 660nm 處吸光值 A，分別記為 A 測定管、A 標準管和 A 空白管，△A=A 測定管-A 空白管，△A 標準=A 標準管-A 空白管，空白管只需測一次。 | |||
三、速效磷含量計算：
1、 標準曲線的繪制：
以各個標準溶液的濃度為 x 軸，其對應的△A 標準為 y 軸，繪制標準曲線，得到標準方程 y=kx+b， 將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）
2、 速效磷含量的計算：
速效磷含量（μmol /g 鮮重）=x×V 樣÷（V 樣×W÷V 樣總）=x÷W。
V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質量，g。
注意事項：
1、 工作液（定磷劑）應現配現用，正常顏色為淺黃色，如有變色或變藍則均為失效。
2、 此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管或 EP 管等試驗器材均要求嚴格無磷。
3、 顯色結束后應立即檢測。
4、 當△A 大于 1 時，建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定。
5、 用 96 孔板檢測時，注意板孔中的液體有無氣泡，如有氣泡應排除氣泡后再測定 OD 值。
