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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性檢測(cè)試劑盒說明書 微量法
貨號(hào)：4033
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2mL丙酮溶解，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑三：液體30mL×1 瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，5 mmol/L的對(duì)硝基苯酚溶液，4℃保存。臨用前用試劑一將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋50倍得100μmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）是土壤微生物分泌的溶酶體中的一種酸性水解酶。其活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性。
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰、30-50目篩（或更小）和蒸餾水。
一、樣本處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30-50目篩。二、測(cè)定步驟：
（1） 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，波長(zhǎng)調(diào)至400nm，蒸餾水調(diào)零。
（2） 加樣表：
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.03 | 0.03 | - | - |
試劑一（μL） | 165 | 165 | - | - |
試劑二（μL） | 15 | - | - | - |
混勻，37℃水浴1h 后，立即沸水浴5min（蓋緊， 防止水分散失），流水/冰浴冷卻。 | - | - | ||
試劑二（μL） | - | 15 | - | - |
12000g 25℃離心10min，取上清液 | - | - | ||
上清液（μL） | 100 | 100 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品（μL） | - | - | 100 | - |
蒸餾水（μL） | - | - | 100 | |
試劑三（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
室溫靜置2min 后，10000g 常溫離心5min，吸取200μL上清于微量玻璃比色皿或直接在96孔板中，測(cè)定400nm處的吸光值A。分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 | ||||
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol 對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-NAG活力（U/g 土樣）＝ΔA÷ (ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V 反總÷W÷T =0.432× ΔA÷ ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W。
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V 反總：反應(yīng)體系總體積：1.8×10-4 L；C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，100μmol/L； W：樣本質(zhì)量。
1、當(dāng)ΔA 大于 1 時(shí)，建議將上清液稀釋后進(jìn)行測(cè)定；當(dāng)ΔA 小于 0.02 時(shí)，建議延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。計(jì)算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)或注意反應(yīng)時(shí)間變化。
