復能基因現在提供:
1048條人源、672條小鼠源、408條大鼠源miRNA插入各種表達載體中構建的miExpress?microRNA前體表達克隆。
miRNA靶標的表達克隆編碼基因的3’端非翻譯區(3’-UTR)涵蓋了人類編碼基因20000個miRNA靶標表達克隆。(3’-UTR,即編碼基因的3’端非翻譯區)
利用這些miRNA表達克隆研究相應基因或者蛋白的表達調節情況。配合采用熒光素酶報告基因的靶標克隆,可以和miRNA表達克隆一起進行miRNA功能篩選合確證,以及miRNA靶標基因的篩選和確證的交互實驗。
復能基因同時也提供多套的人類基因組和小鼠基因組的全長基因ORF表達克隆。用于miRNA靶標的對應蛋白的功能互補實驗。由于這些ORF克隆不含3’-UTR,可以用于特種miRNA對內源靶基因抑制后的拯救實驗,進一步確證miRNA功能及靶標基因。
miExpress?人類基因組的miRNA前體表達克隆
復能基因采用基于貓免疫缺陷病的慢病毒系統,構建了miRNA前體表達克隆的載體骨架。RNA聚合酶III型的H1啟動子驅動轉錄前體miRNA的莖環前體(大約有150核苷酸長度)。隨后通過RNAi的酶系加工生成成熟的miRNA。使得在同一載體的CMV啟動子的驅動下共表達報告基因eGFP,雙順反子下游的新霉素篩選基因也同時表達。可作為監測miRNA表達,轉染和轉化的效率的參考標準。
RISC-miRNA復合體通過結合靶基因的mRNA的3’非編碼區(3’-UTR)成功地調節靶基因。1)表達水平和翻譯水平的抑制;2)mRNA的被切割,被降解和豐度的下降。
MicroRNA前體表達克隆
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